GB/T 14233.2-2005《醫(yī)用輸液、輸血、注射器具檢驗方法 第 2 部分：生物學(xué)試驗方法》 中第 3 章無菌試驗規(guī)定了無菌醫(yī)療器械微生物污染檢測的通用方法，適用于無菌口罩（包括醫(yī)用外科口罩、醫(yī)用防護口罩等滅菌型口罩）的微生物含量檢測，用于驗證口罩是否符合無菌要求。

試驗基本要素

1. 試驗?zāi)康?/h3>

將無菌口罩或其浸提液接種于培養(yǎng)基內(nèi)，檢驗供試品是否存在細菌和真菌污染，確認口罩滅菌效果符合要求。

2. 適用范圍

適用于滅菌型口罩的無菌性檢測，非滅菌型口罩通常采用 GB 15979-2002《一次性使用衛(wèi)生用品》附錄 B 中的微生物限度檢測方法。

3. 試劑與設(shè)備

試驗前準備

1. 器具滅菌

• 壓力蒸汽滅菌：121°C，30 分鐘

• 干熱滅菌：160°C，2 小時

2. 無菌室驗證

• 消毒后檢查：3 只直徑 90mm 培養(yǎng)皿，倒營養(yǎng)瓊脂，30-35°C 培養(yǎng) 48h 無菌后，在操作臺暴露 30 分鐘，培養(yǎng)后平均菌落數(shù)≤1 個

• 試驗過程中同步監(jiān)測空氣質(zhì)量

3. 方法驗證（關(guān)鍵步驟）

對未知或可疑的口罩樣品，需按《中國藥典》無菌檢查法規(guī)定進行抑菌性驗證試驗，確認供試品無抑菌活性或可忽略不計，避免假陰性結(jié)果。

試驗操作流程

1. 供試品數(shù)量

同一批號3-11 個單位供試品，根據(jù)口罩規(guī)格和檢驗需求調(diào)整。

2. 浸提介質(zhì)選擇

優(yōu)先使用9g/L 無菌氯化鈉溶液，也可選擇符合《中國藥典》要求的其他稀釋液和沖洗液。

3. 供試液制備（核心步驟）

基本原則：優(yōu)先采用將口罩或其有代表性各部分（如內(nèi)層、外層、熔噴層）直接投放入培養(yǎng)基內(nèi)培養(yǎng)。若口罩結(jié)構(gòu)復(fù)雜不適宜直接投放，按以下方法制備：

無菌操作，制備后 2 小時內(nèi)使用

按口罩表面積計算：每 10cm2 加入 1mL 浸提介質(zhì)

充分振搖，確保浸提介質(zhì)完全洗滌口罩表面

特殊情況可采用薄膜過濾法處理樣品

4. 接種與培養(yǎng)

接種方式：按《中國藥典》無菌檢查法規(guī)定選擇，可采用直接接種或薄膜過濾法

培養(yǎng)條件：

• 需氧菌、厭氧菌：30-35°C，培養(yǎng) 14 天

• 真菌：20-25°C，培養(yǎng) 14 天

  觀察頻率：每日觀察，記錄培養(yǎng)基渾濁度、菌落生長情況等

5. 結(jié)果判定

• 若所有培養(yǎng)基均澄清透明，無微生物生長，判定為無菌

• 若任一培養(yǎng)基出現(xiàn)渾濁或菌落生長，需進一步鏡檢和微生物鑒定，確認污染類型

試驗報告內(nèi)容

供試品名稱、規(guī)格型號、生產(chǎn)批號、滅菌批號

供試液制備方法（直接投放 / 浸提法 / 薄膜過濾法）

接種方式、培養(yǎng)基種類、培養(yǎng)條件

每日觀察結(jié)果記錄

最終判定結(jié)論（無菌 / 污染）及污染微生物種類（如有）

關(guān)鍵注意事項

無菌操作：全過程嚴格無菌，防止外源性污染

樣品代表性：需檢測口罩關(guān)鍵部位（如與口鼻接觸區(qū)域、呼吸閥等）

培養(yǎng)時間：不得少于 14 天，確保慢生長微生物充分繁殖

結(jié)果復(fù)核：出現(xiàn)陽性結(jié)果時，需重新取樣檢測并進行微生物鑒定，排除試驗操作污染

與其他標準的關(guān)聯(lián)

無菌口罩微生物指標判定依據(jù)：YY/T 0969-2013《一次性使用醫(yī)用口罩》、**GB 19083-2010《醫(yī)用防護口罩技術(shù)要求》** 等產(chǎn)品標準

無菌檢查法細節(jié)參照：《中國藥典》（現(xiàn)行版）附錄無菌檢查法規(guī)定

新版標準變化：GB/T 14233.2-2025 已刪除無菌試驗和細菌內(nèi)毒素試驗，增加浸提液制備，無菌口罩檢測仍可參考 2005 版執(zhí)行