一、標準基本信息

標準編號：GB 15979-2024標準名稱：一次性使用衛(wèi)生用品衛(wèi)生要求發(fā)布日期：2024 年 6 月 25 日實施日期：2025 年 7 月 1 日代替標準：GB 15979-2002附錄 B 性質(zhì)：規(guī)范性附錄，規(guī)定了產(chǎn)品微生物檢測方法

二、適用范圍

附錄 B 適用于一次性使用衛(wèi)生用品（包括非無菌口罩）的微生物檢測，包括細菌菌落總數(shù)、真菌菌落總數(shù)、大腸菌群、銅綠假單胞菌、金黃色葡萄球菌、溶血性鏈球菌的檢測。

非無菌口罩屬于一次性使用衛(wèi)生用品中的 "其他衛(wèi)生用品" 類別，適用于本附錄規(guī)定的所有檢測項目。

三、檢測項目與指標要求

根據(jù) GB 15979-2024 表 4 產(chǎn)品微生物指標要求，非無菌口罩（普通級）的微生物限量如下：

消毒級非無菌口罩的初始污染菌應≤10,000 CFU/g，其他指標與普通級相同。

四、樣品采集與處理

1. 樣品采集

采樣數(shù)量：隨機抽取5 個獨立包裝的樣品，每個樣品作為一個檢測單位

采樣方法：在無菌條件下，打開包裝，用無菌剪刀剪取口罩的中間部分（避開邊緣和耳掛），稱取10g樣品（精確到 0.1g）

注意事項：采樣時避免污染樣品，采樣工具需經(jīng)滅菌處理

2. 樣品處理

將 10g 樣品放入含有90mL 無菌生理鹽水（或 0.03mol/L 磷酸鹽緩沖液 PBS，含 0.1% 吐溫 - 80）的無菌均質(zhì)袋中

用均質(zhì)器在8000-10000r/min下均質(zhì)1-2 分鐘，制成 1:10 的樣品勻液

若樣品含抑菌成分，需在稀釋液中加入相應的中和劑，以消除抑菌作用

樣品勻液需在2 小時內(nèi)完成檢測，若不能及時檢測，需在2-8℃下保存，且保存時間不超過24 小時

五、具體檢測方法

1. 細菌菌落總數(shù)檢測

稀釋：將 1:10 樣品勻液進行 10 倍系列稀釋，選擇 2-3 個適宜稀釋度（通常為 10?、101、102）

接種：取每個稀釋度的樣品勻液1mL，接種于2 個無菌培養(yǎng)皿中（代替舊版的 5 個培養(yǎng)皿）

培養(yǎng)：倒入冷卻至45℃左右的營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基，混勻，待凝固后倒置，在36℃±1℃下培養(yǎng)48h±2h

計數(shù)：選取菌落數(shù)在30-300CFU之間的培養(yǎng)皿進行計數(shù)，計算平均值，結(jié)果以 CFU/g 表示

2. 真菌菌落總數(shù)檢測

稀釋：同細菌菌落總數(shù)檢測

接種：取每個稀釋度的樣品勻液1mL，接種于2 個無菌培養(yǎng)皿中

培養(yǎng)：倒入冷卻至45℃左右的沙堡弱瓊脂培養(yǎng)基，混勻，待凝固后倒置，在28℃±1℃下培養(yǎng)72h±3h

計數(shù)：選取菌落數(shù)在10-150CFU之間的培養(yǎng)皿進行計數(shù)，計算平均值，結(jié)果以 CFU/g 表示

3. 大腸菌群檢測（定性）

增菌：取 1:10 樣品勻液10mL，加入10mL 雙倍濃度乳糖膽鹽發(fā)酵培養(yǎng)基中，在36℃±1℃下培養(yǎng)24h±2h

觀察：若發(fā)酵管產(chǎn)酸產(chǎn)氣，需進行分離培養(yǎng)；若不產(chǎn)酸產(chǎn)氣，可報告未檢出大腸菌群

分離培養(yǎng)：將產(chǎn)氣的發(fā)酵管轉(zhuǎn)種于伊紅美藍瓊脂培養(yǎng)基，在36℃±1℃下培養(yǎng)18-24h

鑒定：挑取可疑菌落（紫黑色有金屬光澤）進行革蘭氏染色，鏡檢為革蘭氏陰性無芽孢桿菌，且能發(fā)酵乳糖產(chǎn)酸產(chǎn)氣，可報告檢出大腸菌群

4. 金黃色葡萄球菌檢測

增菌：取 1:10 樣品勻液10mL，加入10mL 雙倍濃度亞碲酸鉀肉湯培養(yǎng)基中，在36℃±1℃下培養(yǎng)24h±2h

分離培養(yǎng)：將增菌液轉(zhuǎn)種于Baird-Parker 培養(yǎng)基（新版首選）或血瓊脂培養(yǎng)基，在36℃±1℃下培養(yǎng)24-48h

鑒定：

挑取可疑菌落（黑色有暈圈）進行革蘭氏染色，鏡檢為革蘭氏陽性球菌，呈葡萄狀排列

進行血漿凝固酶試驗（試管法）：吸取 1:4 新鮮血漿 0.5mL，加入等量待檢菌 24h 肉湯培養(yǎng)物，在 **36℃±1℃** 下培養(yǎng)，24h 內(nèi)呈現(xiàn)凝塊即為陽性

可使用生化鑒定試劑或生化鑒定卡進行鑒定

5. 銅綠假單胞菌檢測

增菌：取 1:10 樣品勻液10mL，加入10mL 雙倍濃度綠膿桿菌增菌液中，在36℃±1℃下培養(yǎng)24h±2h

分離培養(yǎng)：將增菌液轉(zhuǎn)種于 ** cetrimide 瓊脂培養(yǎng)基 **，在36℃±1℃下培養(yǎng)24-48h

鑒定：

挑取可疑菌落（藍綠色有熒光）進行革蘭氏染色，鏡檢為革蘭氏陰性桿菌

進行氧化酶試驗：用無菌棉簽擦拭菌落，滴加氧化酶試劑，10 秒內(nèi)呈現(xiàn)紫色即為陽性

進行綠膿菌素試驗：陽性者可報告檢出銅綠假單胞菌

6. 溶血性鏈球菌檢測

增菌：取 1:10 樣品勻液10mL，加入10mL 雙倍濃度鏈球菌增菌液中，在36℃±1℃下培養(yǎng)24h±2h

分離培養(yǎng)：將增菌液轉(zhuǎn)種于血瓊脂培養(yǎng)基，在36℃±1℃下培養(yǎng)24-48h

鑒定：

挑取可疑菌落（β- 溶血，透明溶血環(huán)）進行革蘭氏染色，鏡檢為革蘭氏陽性球菌，呈鏈狀排列

進行桿菌肽敏感試驗：陽性者可報告檢出溶血性鏈球菌

六、結(jié)果判定與報告

結(jié)果判定：所有檢測項目均需符合表 4 中的限量要求，若有一項不符合，則判定該批次產(chǎn)品不合格

結(jié)果報告：

細菌菌落總數(shù)和真菌菌落總數(shù)：報告實測值，單位為 CFU/g

特定微生物（大腸菌群、銅綠假單胞菌、金黃色葡萄球菌、溶血性鏈球菌）：報告 "檢出" 或 "未檢出"

檢測報告需注明標準編號、檢測日期、檢測人員等信息

七、新版標準主要變化（與 GB 15979-2002 相比）

培養(yǎng)皿數(shù)量：從 "接種 5 個平皿" 改為 "接種 2 個平皿"，提高檢測效率

金黃色葡萄球菌檢測：增加 Baird-Parker 培養(yǎng)基作為首選，刪除血漿凝固酶試驗的玻片法，新增生化鑒定試劑使用方法

培養(yǎng)條件：部分檢測項目的培養(yǎng)時間略有調(diào)整，縮短了檢測周期

中和劑使用：明確了含抑菌成分樣品的中和劑使用要求

結(jié)果報告：統(tǒng)一了結(jié)果報告的格式和要求

八、注意事項

所有檢測操作均需在無菌條件下進行，避免交叉污染

培養(yǎng)基和試劑需在有效期內(nèi)使用，且經(jīng)滅菌處理

檢測過程中需設置陽性對照和陰性對照，以驗證檢測方法的有效性

檢測人員需具備相應的微生物檢測資質(zhì)，熟悉標準操作流程

檢測結(jié)果需及時記錄，原始數(shù)據(jù)需保存至少1 年