本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了公共場(chǎng)所集中空調(diào)通風(fēng)系統(tǒng)6類微生物指標(biāo)的檢測(cè)方法，適用于各類公共場(chǎng)所集中空調(diào)通風(fēng)系統(tǒng)，其他場(chǎng)所可參照?qǐng)?zhí)行。以下按檢測(cè)對(duì)象分類整理核心內(nèi)容：

一、冷卻水與冷凝水中嗜肺軍團(tuán)菌（第3章）

1. 檢測(cè)目的

定性測(cè)定冷卻水、冷凝水及其沉積物中嗜肺軍團(tuán)菌，評(píng)估軍團(tuán)菌病感染風(fēng)險(xiǎn)。

2. 核心原理

樣品經(jīng)培養(yǎng)在GVPC瓊脂平板生成典型菌落，在BCYE瓊脂生長(zhǎng)而在BCYE-CYE（缺L-半胱氨酸）不生長(zhǎng)，結(jié)合生化與血清學(xué)鑒定確認(rèn)嗜肺軍團(tuán)菌。

3. 關(guān)鍵儀器與培養(yǎng)基

4. 采樣規(guī)范

• 采樣瓶：滅菌500mL廣口瓶，加0.3-0.5mL硫代硫酸鈉中和氧化物

• 采樣點(diǎn)：冷卻水距塔壁20cm、液面下10cm；冷凝水在排水管或冷凝水盤(pán)

• 采樣量：每點(diǎn)無(wú)菌取水樣約500mL

• 保存：2天內(nèi)送達(dá)實(shí)驗(yàn)室，避光避熱，室溫≤15天，無(wú)需冷凍

5. 檢驗(yàn)流程

1. 樣品預(yù)處理：沉淀或1000r/min離心1min去雜質(zhì)

2. 過(guò)濾：濾膜過(guò)濾后置于15mL滅菌水充分洗脫

3. 處理方式：洗脫液+熱處理(50℃水浴30min)+酸處理(pH2.2,5min)各0.1mL接種GVPC平板

4. 培養(yǎng)：35-37℃、2.5%CO?培養(yǎng)10天，第3天起每日觀察

5. 驗(yàn)證：可疑菌落接種BCYE/BCYE-CYE，前者生長(zhǎng)后者不生長(zhǎng)為軍團(tuán)菌

6. 鑒定：生化（氧化酶-/+、硝酸鹽還原-、尿素酶-、明膠液化+、水解馬尿酸）+血清學(xué)分型

6. 結(jié)果判定

陽(yáng)性：檢出符合上述特征的嗜肺軍團(tuán)菌；陰性：未檢出

二、送風(fēng)中細(xì)菌總數(shù)（第6章）

1. 檢測(cè)目的

定量測(cè)定送風(fēng)空氣中細(xì)菌污染水平，評(píng)估空氣質(zhì)量。

2. 核心原理

撞擊法采樣，營(yíng)養(yǎng)瓊脂35-37℃培養(yǎng)48h，計(jì)數(shù)嗜中溫性需氧/兼性厭氧菌落總數(shù)（CFU/m3）。

3. 采樣與培養(yǎng)

• 采樣：撞擊式采樣器，采樣量≥50L，采樣點(diǎn)在送風(fēng)口下方15-20cm、水平50-100cm

• 培養(yǎng)：營(yíng)養(yǎng)瓊脂35-37℃，48h，計(jì)數(shù)30-300CFU平板

• 結(jié)果計(jì)算：細(xì)菌總數(shù)(CFU/m3)=平均菌落數(shù)×1000/采樣體積(L)

三、送風(fēng)中真菌總數(shù)（第7章）

1. 檢測(cè)目的

定量測(cè)定送風(fēng)真菌污染，評(píng)估過(guò)敏與霉變風(fēng)險(xiǎn)。

2. 核心原理

撞擊法采樣，沙氏瓊脂（含氯霉素）28℃培養(yǎng)5天，計(jì)數(shù)真菌菌落總數(shù)（CFU/m3）。

3. 關(guān)鍵參數(shù)

• 培養(yǎng)基：沙氏瓊脂+氯霉素（抑制細(xì)菌生長(zhǎng)）

• 培養(yǎng)：28℃，5天

• 限值參考（WS394-2012）：普通場(chǎng)所≤500CFU/m3；檔案室≤300CFU/m3

四、送風(fēng)中β-溶血性鏈球菌（第8章）

1. 檢測(cè)目的

定性/定量測(cè)定送風(fēng)空氣中β-溶血性鏈球菌，評(píng)估呼吸道感染風(fēng)險(xiǎn)。

2. 核心原理

撞擊法采樣于血瓊脂，35-37℃培養(yǎng)24-48h，觀察β溶血環(huán)，結(jié)合鏡檢與生化鑒定。

3. 關(guān)鍵要點(diǎn)

• 培養(yǎng)基：血瓊脂平板（羊血/兔血）

• 鑒定：革蘭氏陽(yáng)性鏈狀球菌，β溶血，桿菌肽敏感，CAMP試驗(yàn)等

• 結(jié)果：報(bào)告有無(wú)檢出，必要時(shí)定量（CFU/m3）

五、送風(fēng)中嗜肺軍團(tuán)菌（第9章）

1. 檢測(cè)目的

定性測(cè)定送風(fēng)空氣中嗜肺軍團(tuán)菌，評(píng)估空氣傳播感染風(fēng)險(xiǎn)。

2. 核心原理

液體沖擊法采集氣溶膠，經(jīng)酸處理后培養(yǎng)，同冷卻水檢測(cè)流程鑒定。

3. 采樣與培養(yǎng)

• 采樣設(shè)備：微生物氣溶膠濃縮器（流量≥100L/min）+液體沖擊采樣器（7-15L/min）

• 吸收液：GVPC液體培養(yǎng)基+酵母提取液雙份采樣

• 采樣量：每點(diǎn)采集1-2m3空氣

• 保存：4h內(nèi)送實(shí)驗(yàn)室，避光避熱

• 培養(yǎng)：同冷卻水檢測(cè)，35-37℃、5%CO?培養(yǎng)10天

4. 結(jié)果判定

系統(tǒng)陽(yáng)性：任一采樣點(diǎn)檢出嗜肺軍團(tuán)菌；系統(tǒng)陰性：全部采樣點(diǎn)未檢出

六、風(fēng)管內(nèi)表面細(xì)菌總數(shù)與真菌總數(shù)（第11章）

1. 檢測(cè)目的

定量測(cè)定風(fēng)管內(nèi)表面微生物污染，評(píng)估系統(tǒng)清潔度。

2. 核心原理

定量采樣機(jī)器人或25cm2規(guī)格板擦拭采樣，分別用營(yíng)養(yǎng)瓊脂（35-37℃,48h）和沙氏瓊脂（28℃,5天）計(jì)數(shù)，結(jié)果以CFU/cm2表示。

3. 采樣與處理

• 采樣工具：無(wú)菌棉簽/擦拭布，用Tween-80水溶液濕潤(rùn)

• 采樣面積：25-100cm2，無(wú)菌操作擦拭表面

• 處理：擦拭物放入Tween-80水溶液，10倍梯度稀釋，取適宜稀釋度接種

• 培養(yǎng)：同送風(fēng)中細(xì)菌/真菌總數(shù)培養(yǎng)條件

七、質(zhì)量控制要點(diǎn)

1. 所有采樣器具需滅菌，操作全程無(wú)菌

2. 空白對(duì)照：每批樣品設(shè)采樣介質(zhì)空白、試劑空白、培養(yǎng)空白

3. 陽(yáng)性對(duì)照：定期用標(biāo)準(zhǔn)菌株驗(yàn)證檢測(cè)系統(tǒng)有效性

4. 人員資質(zhì)：檢測(cè)人員需經(jīng)專業(yè)培訓(xùn)，持證上崗

5. 結(jié)果報(bào)告：注明檢測(cè)依據(jù)、采樣點(diǎn)、培養(yǎng)條件、菌落數(shù)及換算結(jié)果

八、標(biāo)準(zhǔn)關(guān)系與限值參考

• 本標(biāo)準(zhǔn)為檢測(cè)方法標(biāo)準(zhǔn)，結(jié)果判定需結(jié)合WS 394-2012《公共場(chǎng)所集中空調(diào)通風(fēng)系統(tǒng)衛(wèi)生規(guī)范》限值要求

• 主要限值參考：

• 冷卻水/冷凝水：嗜肺軍團(tuán)菌不得檢出

• 送風(fēng)：細(xì)菌總數(shù)≤500CFU/m3；真菌總數(shù)≤500CFU/m3；β-溶血性鏈球菌不得檢出

• 風(fēng)管內(nèi)表面：細(xì)菌總數(shù)≤100CFU/cm2；真菌總數(shù)≤100CFU/cm2