一、檢測依據(jù)

GB/T 14233.2-2005《醫(yī)用輸液、輸血、注射器具檢驗方法 第2部分：生物學(xué)試驗方法》第3章"無菌試驗"，該方法引用《中華人民共和國藥典》相應(yīng)版本的無菌檢查法。

二、檢測目的

驗證無菌口罩經(jīng)滅菌處理后是否達到無菌要求，即不得檢出任何活微生物。

三、核心試驗原理

將無菌口罩或其浸提液接種于適宜的培養(yǎng)基中，在規(guī)定條件下培養(yǎng)，觀察是否有微生物生長，以判斷供試品是否無菌。

四、試驗準備

1. 環(huán)境要求

必須在環(huán)境潔凈度10000級下的局部潔凈度100級的單向流空氣區(qū)域內(nèi)或隔離系統(tǒng)中進行，全過程嚴格無菌操作。

2. 主要設(shè)備

3. 培養(yǎng)基選擇

4. 試劑與稀釋液

• 0.9%無菌氯化鈉注射液(生理鹽水)

• 聚山梨酯80(表面活性劑，用于難溶性樣品)

• 中和劑(用于中和口罩可能含有的抗菌成分，需經(jīng)驗證)

五、無菌口罩檢測特殊流程

1. 樣品取樣與預(yù)處理

1. 隨機抽取規(guī)定數(shù)量的無菌口罩(通常5-10個)

2. 在超凈工作臺內(nèi)，用無菌剪刀將口罩剪成約1cm×1cm碎片

3. 取規(guī)定重量(如10g)的碎片，放入無菌均質(zhì)袋中

4. 加入100mL無菌生理鹽水(或含中和劑的稀釋液)，均質(zhì)處理2-5分鐘，制成1:10的浸提液

2. 供試品處理方法(二選一)

方法A：直接接種法

• 取上述浸提液，分別接種至硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基和改良馬丁培養(yǎng)基中

• 每管接種量不超過培養(yǎng)基體積的10%，每株培養(yǎng)基至少接種2管

方法B：薄膜過濾法(推薦用于口罩檢測)

1. 將浸提液通過0.45μm無菌濾膜過濾

2. 用適量無菌生理鹽水沖洗濾膜(一般3-5次，每次50-100mL)

3. 將濾膜分別貼于硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基和改良馬丁培養(yǎng)基平板上，或放入相應(yīng)液體培養(yǎng)基中

3. 陽性對照與空白對照

六、培養(yǎng)與觀察

1. 接種后，硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基置于30℃35℃**培養(yǎng)，改良馬丁培養(yǎng)基置于**23℃28℃培養(yǎng)

2. 連續(xù)培養(yǎng)14天，每天觀察培養(yǎng)基是否渾濁、有無菌落生長

3. 若發(fā)現(xiàn)渾濁或菌落，立即涂片鏡檢，判斷是否為污染菌

七、結(jié)果判定

1. 符合規(guī)定：所有供試品管均澄清，無微生物生長；陽性對照管有明顯微生物生長；空白對照管澄清無生長

2. 不符合規(guī)定：任何一個供試品管出現(xiàn)微生物生長，即判為無菌檢查不合格

八、關(guān)鍵注意事項

1. 無菌口罩檢測與非無菌口罩不同，非無菌口罩允許有一定量微生物(如細菌菌落總數(shù)≤20CFU/g)，而無菌口罩必須完全無菌

2. 口罩可能含有環(huán)氧乙烷殘留，需經(jīng)解析期后再檢測，避免影響微生物生長

3. 若口罩含有抗菌成分，必須使用經(jīng)驗證的中和劑消除抑菌作用

4. 試驗過程中所有接觸供試品的器具必須徹底滅菌