一、標(biāo)準(zhǔn)基本信息

• 標(biāo)準(zhǔn)編號(hào)：GB/T 18204.3-2025

• 發(fā)布日期：2025-05-30

• 實(shí)施日期：2025-12-01

• 發(fā)布單位：國家市場(chǎng)監(jiān)督管理總局、國家標(biāo)準(zhǔn)化管理委員會(huì)

• 歸口單位：國家疾病預(yù)防控制局

• 代替標(biāo)準(zhǔn)：GB/T 18204.3-2013《公共場(chǎng)所衛(wèi)生檢驗(yàn)方法 第3部分：空氣微生物》

• 適用范圍：適用于公共場(chǎng)所中空氣微生物指標(biāo)（細(xì)菌總數(shù)、真菌總數(shù)、β-溶血性鏈球菌和嗜肺軍團(tuán)菌）的測(cè)定，其他場(chǎng)所參照?qǐng)?zhí)行

二、沉降菌檢測(cè)基本原理

自然沉降法基于地心引力原理，讓空氣中攜帶微生物的氣溶膠粒子垂直自然沉降到瓊脂培養(yǎng)基表面，經(jīng)培養(yǎng)后計(jì)數(shù)形成的菌落數(shù)，以此評(píng)估空氣中微生物污染程度。該方法操作簡(jiǎn)便，但采集效率相對(duì)較低，穩(wěn)定性稍差，適合基層實(shí)驗(yàn)室和現(xiàn)場(chǎng)快速篩查。

三、檢測(cè)指標(biāo)與適用方法

四、沉降菌檢測(cè)詳細(xì)操作流程

1. 采樣前準(zhǔn)備

（1）儀器設(shè)備準(zhǔn)備

• 培養(yǎng)皿：φ90mm無菌平皿，面積約63.6cm2

• 培養(yǎng)基：

• 細(xì)菌總數(shù)：營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基或胰酪大豆胨瓊脂培養(yǎng)基

• 真菌總數(shù)：沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基（SDA）或馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基（PDA）

• 輔助設(shè)備：無菌鑷子、酒精燈、溫濕度計(jì)、記錄表格、采樣標(biāo)識(shí)等

• 質(zhì)量控制：所有器具需經(jīng)高壓蒸汽滅菌（121℃，15-20分鐘），培養(yǎng)基需進(jìn)行無菌試驗(yàn)

（2）現(xiàn)場(chǎng)準(zhǔn)備

• 采樣前關(guān)閉門窗1小時(shí)，保持室內(nèi)穩(wěn)定狀態(tài)

• 記錄現(xiàn)場(chǎng)溫度、濕度、氣壓等環(huán)境參數(shù)

• 采樣點(diǎn)避開通風(fēng)口、門窗邊緣和人員頻繁活動(dòng)區(qū)域

2. 采樣操作

（1）布點(diǎn)原則

（2）采樣參數(shù)

• 采樣高度：距地面0.8-1.5m（人體呼吸帶高度）

• 暴露時(shí)間：30分鐘（允許±5分鐘浮動(dòng)）

• 操作步驟：

• 用無菌鑷子打開平皿蓋，使培養(yǎng)基表面暴露于空氣中

• 平皿蓋需反扣在平皿旁，避免污染

• 暴露結(jié)束后，立即蓋上平皿蓋，做好標(biāo)識(shí)（編號(hào)、地點(diǎn)、時(shí)間）

• 空白對(duì)照：每批采樣設(shè)置1個(gè)空白樣，不暴露于空氣中，與樣品同條件培養(yǎng)

3. 樣品運(yùn)輸與保存

• 采樣后4小時(shí)內(nèi)送至實(shí)驗(yàn)室，若無法及時(shí)送達(dá)，需置于4℃冷藏保存，保存時(shí)間不超過24小時(shí)

• 運(yùn)輸過程中避免劇烈震動(dòng)和溫度變化

4. 培養(yǎng)與計(jì)數(shù)

（1）培養(yǎng)條件

（2）菌落計(jì)數(shù)

• 培養(yǎng)結(jié)束后，在菌落計(jì)數(shù)器或放大鏡下計(jì)數(shù)平板上的菌落數(shù)

• 計(jì)數(shù)原則：

• 細(xì)菌：計(jì)數(shù)所有肉眼可見的菌落，包括不同形態(tài)、顏色的菌落

• 真菌：計(jì)數(shù)所有酵母菌落和霉菌菌落，注意區(qū)分真菌與細(xì)菌菌落

• 菌落重疊時(shí)，若能明確區(qū)分，可分別計(jì)數(shù)；無法區(qū)分時(shí)，按1個(gè)菌落計(jì)

• 空白對(duì)照平板不得有菌落生長(zhǎng)，否則本次采樣結(jié)果無效

5. 結(jié)果計(jì)算與報(bào)告

（1）計(jì)算公式

采用奧梅梁斯基公式計(jì)算空氣中微生物濃度：

菌落總數(shù)（CFU/m3）= 50000 × N ÷ (A × T)

• N：平均菌落數(shù)（所有采樣點(diǎn)菌落數(shù)的平均值）

• A：平皿面積（cm2），φ90mm平皿約為63.6cm2

• T：暴露時(shí)間（分鐘），標(biāo)準(zhǔn)為30分鐘

（2）結(jié)果報(bào)告

• 以CFU/m3為單位報(bào)告結(jié)果

• 保留整數(shù)，若菌落數(shù)為0，報(bào)告為"<1"CFU/m3

• 同時(shí)報(bào)告采樣條件（溫度、濕度、采樣時(shí)間、布點(diǎn)方式等）

五、質(zhì)量控制要求

1. 空白對(duì)照：每批樣品設(shè)置1個(gè)空白樣，檢驗(yàn)培養(yǎng)基和操作過程的無菌性

2. 平行樣：每10個(gè)樣品至少設(shè)置1個(gè)平行樣，平行樣相對(duì)偏差應(yīng)≤20%

3. 人員操作：采樣人員需經(jīng)專業(yè)培訓(xùn)，嚴(yán)格執(zhí)行無菌操作規(guī)范

4. 儀器校準(zhǔn)：定期校準(zhǔn)培養(yǎng)箱溫度，確保溫度精度符合要求

5. 記錄完整：詳細(xì)記錄采樣時(shí)間、地點(diǎn)、環(huán)境參數(shù)、操作過程等信息，確?？勺匪菪?/p>

六、與2013版標(biāo)準(zhǔn)的主要區(qū)別

七、注意事項(xiàng)與常見問題

1. 采樣高度：必須在0.8-1.5m范圍內(nèi)，避免過高或過低影響結(jié)果代表性

2. 暴露時(shí)間：嚴(yán)格控制在30分鐘，避免時(shí)間過長(zhǎng)或過短導(dǎo)致結(jié)果偏差

3. 菌落計(jì)數(shù)：真菌培養(yǎng)需5-7天，不可提前計(jì)數(shù)，避免遺漏緩慢生長(zhǎng)的真菌

4. 結(jié)果解釋：自然沉降法結(jié)果僅作參考，如需精確測(cè)量，建議采用撞擊法

5. 安全防護(hù)：采樣和培養(yǎng)過程中注意生物安全，避免交叉污染和人員感染

八、應(yīng)用場(chǎng)景

商場(chǎng)、超市、酒店、餐廳等公共場(chǎng)所日常衛(wèi)生監(jiān)測(cè)

醫(yī)院候診區(qū)、學(xué)校教室、辦公室等人員密集場(chǎng)所健康風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估

公共交通工具（地鐵、公交、高鐵）空氣質(zhì)量監(jiān)測(cè)

室內(nèi)裝修后空氣質(zhì)量驗(yàn)收（配合其他指標(biāo)）